食品微生物检测方案
一、方法学
PCR/恒温Lamp方法
二、检测操作流程（以金色葡萄球菌为例）
1.增菌（参考国标GB4789.10-2010）
1）样品处理
称取 25 g 样品至盛有 225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或 10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有 225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或 10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min。若样品为液态，吸取 25 mL 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或 10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀。
增菌液（7.5 %氯化钠肉汤或 10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤）可以用商品化的增菌培养基。
对于不增菌检测，取25g（mL）加入225ml生理盐水中，匀质后直接备检。
2）增菌
将上述样品匀液于36℃培养>6小时（一般过夜培养）
2.增菌液模板DNA制备
取上述增菌液1mL，加到1.5mL无菌离心管中，8000r/min离心5min,吸弃上清，加入50ulDNA提取液，混匀后100℃加热5min，12000r/min离心5min，取上清备用待测。
3．PCR/Lamp检测
根据试剂说明书加样上机检测。
三、设备
1.PCR方法
1）实时荧光定量PCR仪
2）恒温金属浴
3）离心机（微型离心机）
4）移液枪
2.Lamp方法
1）实时荧光恒温检测仪
2）恒温金属浴
3）离心机（微型离心机）
4）移液枪
英闻实时恒温检测箱包含上述设备。
四、优缺点
1.PCR方法技术最成熟，灵敏度、特异性、准确度等各方面优于其他的分子生物学检测方法（包括Lamp），上机后1.5-2小时出结果，试剂成本也略低，但实时荧光定量PCR仪价格要高于恒温检测方法的设备。
2.Lamp方法设备成本略低，上机后40分钟出结果，但检测本底比较高，灵敏度、特异性等略差于PCR方法。
3.PCR和Lamp方法均符合相关的行业标准，在食药监部门可以作为执法检测，安全监管的检测手段。在进出口检验检疫等部门可以作为初筛手段（国标培养法要3-7天才出检测结果）。
