中华人民共和国国家标准
小麦粉破损淀粉测定法 GB 9826-88 α-淀 粉 酶 法
Method for determination of starch damage in flour-A lpha-amylase method
1 主题内容与适用范围 本标准规定了用α-淀粉酶测定小麦粉破损淀粉值的原理使用的试剂、仪器、分析的 步骤以及结果计算。 本标准适用于小麦粉破损淀粉值的测定。
2 方法原理 小麦粉中破损淀粉对α-淀粉酶的敏感性大大高于未破损淀粉,在常温下能被α-淀粉 酶降解生成糊精和一定量的还原糖。利用此特性,在规定的条件下,用α－淀粉酶降解小麦粉中破损淀粉,再用铁氰化钾法测定其还原糖量,并根据法兰德的经验公式计算小麦粉中的破损淀粉值。
3 试剂 以下试剂未经标明的均为分析纯试剂,水为蒸馏水。
3.1 缓冲溶液 溶解4.1 g无水乙酸钠于水中,加入3mL冰乙酸,再用水稀释至1000mL,pH值应为4.7± 0.1。
3.2 提取溶液 将20g氯化钠及0.2g乙酸钙溶于水中,再稀释至1000mL。
3.3 α-淀粉酶液 称取活性相当于15000±1500 A 的α-淀粉酶制剂溶于500mL提取液中,再加入500mL缓冲液,α-淀粉酶活性测定见附录A(补充件)α-淀粉酶活性测定。此溶液用时现配。
3.4 10％(V/V)硫酸溶液。
3.5 12％钨酸钠溶液。
3.6 0.1M碱性铁氰化钾溶液 称取32.9g干燥纯净的铁氰化钾与44.0g无水碳酸钠溶于1000mL水中,贮于棕色瓶避光 保存。
3.7 乙酸盐溶液 70g氯化钾和40g硫酸锌溶于水中,加入200mL冰乙酸,再用水稀释至1000mL。
3.8 10％碘化钾溶液。
3.9 1％淀粉溶液。
3.10 0.1M硫代硫酸钠溶液 称取24.82g硫代硫酸钠(含5个结晶水)和3.8g四硼酸钠溶于1000mL水中,贮于棕色瓶避 光保存,一星期后按GB 5490《粮食、油料和植物油脂检验一般规则》附录B规定方法标 定其浓度。
3.11 酸洗石英砂。
4 仪器和用具
4.1 玻璃试管:φ25×220mm。
4.2 量筒:50mL;25mL。
4.3 恒温水浴:可控温30±0.1℃。
4.4 秒表。
4.5 加液器或移液管:2mL;10mL。
4.6 移液管:5mL。
4.7 玻璃漏斗及中速滤纸。
4.8 电炉。
4.9 锥形瓶:100mL。
4.10 滴定管:10mL。
4.11 天平:感量0.01g;0.1mg。
4.12 pH计或精密pH试纸:可测pH4.7±0.1。
5 分析步骤
5.1 称样量 一般小麦粉均假定其水分含量为14.0％,淀粉含量为68％～72％,称样量为1.00±0.01g。如果淀粉含量过高或过低时,则称样量应按式(1)计算:
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称样量(g)＝──── ………………………………………(1)
(95-P-M)
式中
--100g试样中蛋白质的克数(含氮量×5.7); M--100g试样中水分的克数。
5.2 酶解 称取5.1规定量的试样于玻璃试管中,加入1小勺酸洗石英砂,混匀并将式样摇松倾斜于 试管底部,准确量取46mL已预热至30℃的α-淀粉酶液,先将少许α-淀粉酶液加入试样中并尽量摇匀,立即计时,再加入其余α-淀粉酶液,加盖试管并上下颠倒摇动约30次使试样均匀悬浮.迅速将试管浸入30℃水浴中,然后每隔10min取出试管,上下颠倒摇动10次使试样重新均匀悬浮,恒温酶解刚好60min时,取出试管,立即加入2mL10％硫酸溶液,充分混匀后,再加入2ml12％钨酸钠溶液,摇匀并放置约2min后,用中速滤纸过滤。充去最初几滴,收集滤液于干净锥形瓶中,此滤液即为试样测定液。 另取一支试管不加小麦粉试样,同时同上操作,所得滤液即为空白对照液。
5.3 测定还原糖 准确吸取5ml试样液于试管中,再准确加入10mL 0.1M碱性铁氰化钾溶液,混合后将试管浸入剧烈沸腾的水中(可将试管置于铁丝笼架放入铝锅煮沸的水中,每次可同时作多个样品的测定),继续加热待水再沸腾后开始计时,准确反应20min后,取出试管立即置流水冷却。冷却后将试管中溶液倒入锥形瓶中,并用25mL乙酸盐溶液分三次洗涤试管一并倒入锥形 瓶内,再加入10mL10％碘化钾溶液。然后用0.1M硫代硫酸钠溶液滴定至淡黄色,再加入约1mL 1％淀粉液,继续滴定至溶液蓝色消失(半分钟内溶液不返蓝色),记录用去硫代硫酸钠 溶液的体积为V1(mL)。吸取空白对照液5mL代替试样液,同上操作,记录用去硫代硫酸钠溶液的体积为V2(mL)。
6 结果计算
6.1 氧化5mL样品液(相当于0.1g小麦粉样品) 中还原糖所需0.1M铁氰化钾体积V按式 (2)计算: C V＝(V2 － V1)× ──- ………………………………………………(2) 0.1 式中: V--氧化试样液中还原糖所需的0.1M铁氰化钾液的体积,mL; V1--滴定试样液用去硫代硫酸钠的体积,mL; V2--滴定空白液用去硫代硫酸钠的体积,mL; C--硫代硫酸钠的摩尔浓度,M; 0.1--换算成0.1M铁氰化钾溶液体积的系数。
6.2 小麦粉麦芽糖值的确定 根据式(2) 计算所得V值在表1中用插入法查出相应的100g小麦粉中含有麦芽糖的克数,即为该样品的麦芽糖值L。
