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α化度(糊化度)的测定

目前,α化度的测量方法有双折射法、膨胀法、染料吸收法等。

酶水解法、粘度测量法及淀粉透明度测量法等。不同的测定方法。得到的α化度值会有相当大的差异,这是由于测定基础和基准等不同,产生差异是必然的。当前比较公认的方法是酶法,其次是染料吸收法中的碘电流滴定法。酶法又分为淀粉糖化酶法、葡萄糖淀粉酶法及β-淀粉酶法等,其基本原理都是利用各种酶对糊化淀粉和原淀粉有选择性的分解,通过对生成物的测量得到准确的α化度。

(一) 葡萄糖淀粉酶法

通常,糊化淀粉容易被淀粉酶消化,因此可用消化相对百分率来准确计算α化度。,

1. 仪器与试剂

搅拌器,玻璃均质器,12ml移液管,恒温水浴,台式离心机。

99%乙醇,2molL醋酸缓冲液(PH4.8),10molL氢氧化钠,2molL醋酸,2.6 3uml葡萄糖淀粉酶液,0.025molL盐酸。

2. 测定步骤

试样的调制:试样                     20g(或 20ml),加入 200ml 99%的乙醇,投入高速旋转的家用混合器中连续旋转 1min,使之迅速脱水。生成的沉淀用 3号玻璃过滤器抽滤,用约50m199%的乙醇,接着用50ml乙醚脱水干燥后,放在氯化钙干燥器中,以水力抽滤泵减压                     

干燥过夜,用研钵将其轻轻粉碎,仍保存在同样的干燥器中备用。

操作:将100mg上述的干燥试料放入磨砂配合的玻璃均质器

中,加8ml蒸馏水,用振动式搅拌机搅拌至基本上均匀为止。接着将均质器上下反复几次,使之成为均匀的悬浮液。再用振动式搅拌机均匀化,随即各取悬浮液2ml注入2只容量为20ml的试管中,分别用作被检液和完全α化检液。向被检液试管加 2molL醋酸缓冲液(pH4.8 1.6ml和水0.4ml,而往完全α化检液试管添加 10molLNaOH溶液0.2ml,在证实已于室温下完全溶解之后,加2molL醋酸 1.6ml(醋酸的添加量需预先通过试验决定,其量为使pH调至4.8时所用的醋酸量)。最后加水使容量为4ml。将这2只试管放在37℃的恒温槽中预保温数分钟后,添加酶液lml2.63u),每隔1015min振荡一次,共反应60min。然后,得反应液 0.5ml加入预先放有10ml 0.025molL盐酸(起停止反应的作用)的锥底离心管中,上下振荡数次,在转速为3000rmin的离心机中分离10min。取上层清液0.5m1,用蒸馏水稀释1倍,用SomogyiNelson法(见后)或适当的方法定量还原精,并从下式求出α化度:


市售的玻璃均质器磨砂配合是硬性的配合,需用150400目的金刚砂来调节配合。均质器的配合,以在干燥状态下磨砂配合棒能缓慢地自然落下者为好。

葡萄糖淀粉酶用的是内孢霉或黑曲霉的粗酶。酶活力以在pH4.8的醋酸缓冲液(0.2molL)中,在37℃能将0.2%的可溶性淀粉生成1μg分子葡萄糖的酶量作为1个单位(U)。