淀粉磷酸酯中磷的含量测定方法较多，有重量法、原子吸收法、容量法、分光光度法、电位滴定法等。其中，重量法、容量法和分光光度法较常用。 （－）样品准备
在测定前需要将淀粉磷酸酯中的游离磷洗涤除去。低取代度的在室温水中不膨胀的样品可用蒸馏水进行洗涤；对在室温水由膨胀性大的试样（高取代度的），可用2.5％～3.0％NaCl溶液洗涤，或用7：3甲醇溶液或乙醇溶液进行洗涤。洗涤后烘干待用。
（二）测定步骤
1．重量法
适用于试样中总磷及高取代度试样的结合磷的直接测定。
首先取淀粉磷酸酯样品适量，灼烧后将残余灰分溶于稀酸中，使其转变成正磷酸盐。如量较大，可让它形成[Mg（NH4）PO4］沉淀，然后过滤，燃烧除去滤纸，恒重称量。最后通过换算得出磷的含量：
式中m1——灼烧后残渣质量（g）
m——称样质量（g）
也可让它们形成其他沉淀，如磷钼酸铵沉淀[（NH4）PO4·12MoO3·6H2O］。
2．原子吸收（石墨炉）法
用含 Ni [以 1％Ni（NO3）2的溶液加入］的 4mol／L HCI将颗粒状或糊状淀粉水解，其目的是使炭化过程中磷保持稳定。然后加入磷（以NaH2PO4形式）的标准溶液混匀后过滤，并用石墨炉原子吸收法分析滤液。用Ar作清洗气体，温度90℃，加热50s使之干燥，升温至1400℃炭化30s，2700℃原子化2.5s，在21．36km检测。磷的标准曲线范围为 10～100μg／ml，检测限为3μg／ml，加入磷的回收率为93％～105％。一般干燥玉米淀粉含磷约为0.017％。
3．容量法
（1）电位滴定法 这种方法多用于磷酸酯的分析，简便快速。
①原理：淀粉磷酸单酯含有两个酸式基团，而这两个基团的结构是截然不同的。第一基团存在于颗粒物表面，因而很不稳定。当酸洗或用离子交换树脂充分处理后，便可直接用标准碱溶液定量滴定；第二基团处于颗粒物内部，所以不易被滴定，但如果使淀粉胶化，其空间结构受到破坏，也可以滴定。这两个基团的滴定曲线与H3PO4近似。第一滴定终点在pH5.0左右，第2滴定终点为8.7。所用指示剂为麝香草酚兰和酚酞。
值得注意是不同淀粉，终点会有不同的变化。 ②样品准备：
i酸洗：在0.l mol／L的HCl溶液中加入500g淀粉磷酸酯，混匀成乳浊液，搅拌几分钟后，用布氏漏斗过滤，用酸洗至滤液用草酸铵检验无 Caˉ离子为止。将滤渣转移至蒸馏水中，再过滤，用蒸馏水洗至无Clˉ 离子为止（用AgNO3检验），取出，室温空气下干燥。
ii离子交换：将500g用上述方法处理过的样品分散在1 L水中使成乳浊液，加入100g已洗涤、过筛的离子交换树脂，缓慢搅拌，以防树脂破裂。搅拌时间视不同树脂而定，如用 IR－ 1200—H需4h。然后用 100目的不锈钢筛网滤去树脂，重复上面步骤，将淀粉在室温下空气中干燥。 iii 胶化、离子交换：将20g含有一定湿度的淀粉分散于200ml蒸馏水中，然后倒入 300ml沸水中加热使之胶化。搅拌 5min后，通入N2气，冷却至25℃。加入20g离子交换树脂（如IR－120－H）处理4h。用布氏漏斗过滤，将滤液转至 4L烧坏中稀释至3500ml，加热5min，除去CO2，冷却。
③样品分析：
i颗粒状样品的滴定：取20g含有一定湿度的酸性淀粉样品〔见本法“样品准备中的i、ii”］，分散至400ml煮沸过的蒸馏水中，放入磁力搅拌磁子，烧杯用塑料膜盖上，插入滴定管和玻璃电极，通入N2气，用 0.01mol／L NaOH标准溶液滴定至pH为 9.8，滴定过程中不断搅拌。绘出pH～V NaOH的滴定曲线。
ii胶状淀粉滴定：将已胶化过的淀粉（见本法“样品准备中的iii”）用塑料膜盖好，通入N2气，插入一个大的搅拌棒、滴定管及玻璃电极，用0.lmol／L的NaOH滴定。
④数据处理：通过作图法，找出与滴定终点相应的NaOH体积，并用物质量相等的公式计算出淀粉磷酸酯中磷的含量。
式中 cNaOH——— NaOH标准溶液浓度（mol／L）
30.97——磷的摩尔质量（g／mol）
VNaOH——样品消耗NaOH标准溶液体积（ml）
m样——试样质量（g）
（2）喹钼柠酮法
①游离磷的测定：将2g试样用稀盐酸溶解后，定量转移至250ml容量瓶中，充分摇动5min，稀释至刻度，摇匀，过滤待用。
用移液管吸取以上滤液50～100ml（视磷含量而定）于烧杯中，加 HNO3 5ml，用水稀释至约 120ml。加热煮沸约 5min，用 30ml喹钼柠酮沉淀。继续煮沸，并在低温保持片刻，待沉淀与溶液分清时，取下冷却，中间搅拌l～2次。用脱脂棉过滤，以倾滗法洗涤沉淀3～4次。将沉淀转移到漏斗上，继续用水洗至滤液不呈酸性（取约 20ml滤液，加 1滴混合指示剂和 1滴NaOH溶液，所呈颜色与处理同体积蒸馏水颜色相同为止。或用广泛pH试纸检查）。将黄色沉淀与棉花一起洗进原烧坏中，加入过量（约 5ml）NaOH标准溶液至沉淀完全溶解，加水稀释至 150ml，加 0.5ml混合指示剂，再以标准HCl溶液滴定过量的标准碱。
②总磷测定：称取1～1.5g试样置于50ml凯氏瓶中，加入15mlH2SO4－HNO3，并在瓶口上置一短颈漏斗，在电炉上先低温后高温加热，使瓶内液体沸腾，直至液体变成无色，若溶液出现的黑色或暗棕色不退，则可逐步加入数滴硝酸，至消化进行到液体清亮。冷却后，转移入250ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。吸取 50～ 100ml溶液于烧杯中，加水至约 120ml，煮沸、沉淀与游离磷测定操作相同。
③结果计算：
式中 0.001191—每毫摩尔磷相当的克数（g／mmol）
结合磷=总磷一游离磷
中 162——淀粉分子中每个葡萄糖残基的质量（g）
30. 974——磷的摩尔质量（g／mol）
K1——游离磷换算成磷酸盐的系数，如以磷酸—钠计，则
K1=3.8734
K2——游离磷换算成结合磷酸酯基团的换算系数（以磷
酸一钠计），3.2922
酯化度 VG＝ 1／DS
（3）铈量法
Ce 在0.25～0.3mol／L H2SO4介质中定量地沉淀为淡黄色磷酸铈，溶液中过量Ce 以二苯胺磺酸钠为指示剂，用亚铁盐溶液直接回滴。
实验方法：准确称取一定量的淀粉磷酸酯样品（约含2～10mg磷）于凯氏烧瓶中，消化后（或在高温炉中灰化后用稀酸溶解），转移至250ml锥形瓶中，加水使溶液体积为10～15ml，调整pH至l～2，加热至70～80℃，边摇动边从滴定管加入0. 02mol/L硫酸铈标准溶液 〔8.0862g Ce（SO4）2·4H2O，用 0.5mol／L H2SO4溶解并稀释至 1L〕，待沉淀完全，上层清液呈金黄色时，再过量加入3～4ml，这时溶液酸度为0.5～0.6mol/L。在沸水浴上加热10min，冷至室温，加水至原体积的2倍，使酸度为 0.2～0．3mol／L。为防止磷酸铈沉淀氧化亚铁，必须加热，使沉淀熟化并降低酸度，这样就不需过滤即可实现铈（Ce ）的回滴。向经加热熟化过的溶液，加入 3滴 1％二苯胺磺酸钠，用 0.02mol／L硫酸亚铁铵〔7．8426g（NH4）2Fe（SO4）2·6H2O用0.5mol／LH2SO4溶解并稀释至1L〕标准溶液回滴至溶液红紫色刚消失即为终点。记下消耗的硫酸亚铁铵的体积，计算磷的含量。如沉淀干扰终点判断，可加 CCl4覆盖，使颜色变化清晰。
式中 c1——硫酸铈标准溶液的浓度（mol／L）
V1——硫酸铈标准溶液的体积（ml）
c2——硫酸亚铁铵标准溶液的浓度（mol／L）
V2——回滴硫酸铈标准溶液消耗的硫酸亚铁铵标准溶液体
积（ml）
m样——样品的称样质量（g）
3/4——反应换算系数
30. 97——磷的摩尔质量（g／mol）
（4）分光光度法
①磷钼钒酸法：
i此法用以测定有机及无机物中磷含量的标准方法，测定淀粉中含磷量也常用此法。它不受那些干扰比色分析的离子影响，而且灵敏度较高，用 1cm比色皿可测 5～60μg／ml的磷。
ii试剂：
磷标准溶液：准确称取已在（105土0.2）℃烘箱干燥lh的磷酸二氢钾0.4395g溶于水中，定量转移至100ml容量瓶并稀释至刻度，摇匀。lml含磷0 lmg。
0.25％钒酸铵溶液：在600ml的沸水中加入2.5g偏钒酸铵，冷至 60～70℃，再加入 20ml浓硝酸，冷至室温，用水稀释至1000ml。
5％铝酸铵溶液：将53.lg钼酸铵〔（NH4）6Mo7O24·4H2O〕用水溶解，稀释至 1000ml，贮于棕色瓶中。
iii样品分析：准确称取 10g淀粉磷酸醋样品，放入一坩埚中，用乙醇浸湿，炭化。炭化后的样品在马福炉中550℃灰化，冷却，沿壁加入10ml（1：2） HNO3，混合均匀，盖好。在100℃保持30min，使磷转变为磷酸后定量转移至 100ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度。如溶液混浊，需过滤后再稀释。
吸取20ml上述溶液于100ml容量瓶中，加入（l：2）HNO3, 0.25%钼酸铵和5%钼酸铵各10ml，用蒸馏水稀释至刻度，充分混合后室温放置2h。以试剂为空白，在460nrn处测吸光度
标准曲线：分别吸取 2、5、10、15、20、25ml标准磷溶液于100ml容量瓶中，测定操作同样品。绘制标准曲线，从标准曲线上求得待测样品中磷的量m（mg）。
iv计算
经改进后，此法的灵敏度提高8～10倍，测定范围为0. 5～7μg／ml。
②磷钼蓝法：
I原理：磷酸酯淀粉中所含的结合磷可用浓硫酸湿法消化分解，使其转化为磷酸，然后在强酸性及还原剂存在下，与钼酸铵反应生成磷钼酸铵，在被还原成蓝色的钼蓝，其蓝色的深浅也样品中含磷量成正比。
ii试剂
2％钼酸铵：溶解 10.6g试剂级4个结晶水的钼酸铵于 500ml蒸馏水中。
26％硫酸溶液：小心地将167ml试剂级浓硫酸加入833ml蒸馏水中，混匀。
5％抗坏血酸溶液：溶解 5.0g抗坏血酸于 100ml蒸馏水中，48h后需重新配制。
标准磷溶液：精确称取 0.4395g试剂级磷酸二氢钾溶于100ml蒸馏水中，定量转移至 1000ml容量瓶中，稀释至刻度，作为贮备液，磷含量为 0.lμg P／ml。
吸取10ml储备液于10ml容量瓶中，稀释至刻度，作为测定用标准溶液，磷含量为 10μg P／ml。
iii测定步骤
标准曲线：吸取 2.0、4.0、 6．0、 8.0和 10.0ml标准溶液，分别置于50ml容量瓶中，另一个50ml容量瓶做空白实验用。向每一容量瓶分别加入 2 6％ H2SO4溶液 10ml，2％钼酸铵 5ml，每加一种溶液后摇匀。加蒸馏水，使总体积约为45ml，再加入2ml 5％抗坏血酸溶液，摇匀。将容量瓶放在沸水浴中煮 10min，在冷水浴中冷至室温，稀释至刻度，摇匀。以试剂作空白，在690nrn，用1cm比色皿测定吸光度，绘出吸光度与磷含量的曲线。
样品分析：准确称取淀粉磷酸酯样品0.5～1.0g于凯氏烧瓶内，加入浓硫酸 10～15ml，凯氏烧瓶上口放一小玻璃漏斗。在电炉上小心加热约1h，溶液颜色由黑色变成透明的红棕色时，再加入5ml 30％过氧化氢，继续消化至溶液变成无色透明。继续加热5min左右，使其消化完全。取出冷却，移入100ml容量瓶内，加水至刻度。吸取 1ml于 50ml容量瓶中，加入 10ml 26％硫酸溶液，5ml2％钼酸铵溶液，每次加入后摇匀。用蒸馏水稀释至约45ml，加 5％抗坏血酸溶液 2ml，混匀，在沸水浴中加热 10min，冷却后稀释至刻度。以试剂作空白，测定方法同上。从标准曲线可查出样品的磷量m（μg）。
iv结果计算
式中 V1——滴定样品时消耗0.05mol／L H2SO4标准溶液 的体积（ml）
V。——空白试验消耗0.05mol／L H2SO4标准溶液的体积
