蛋白检测方法 [复制链接]

[em01] 在我的影响中测定蛋白质的方法国际上公认的就只有凯氏定氮法

想要快一点 就只有在消化时间上做文章 1.减少消化样品的量.2.改进催化剂.

隆重推荐一下。

现在好多工厂都买快速检测仪了，贵是贵点，

不过方便生产

阿杜G，打算帮你直接贴出来，这样交流程度可能更好一些，小妹试下噢

[此贴子已经被作者于2007-6-15 10:17:41编辑过]

打开一看，12页呀，帖死我也，算了，把大概目录贴出来即可。

　“蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩脲法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法，即考马斯亮蓝法（Bradford法）。其中Bradford法和Lowry法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10～20倍，比Biuret法灵敏100倍以上。定氮法虽然比较复杂，但较准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。
    值得注意的是，这后四种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质，因为一种蛋白质溶液用这四种方法测定，有可能得出四种不同的结果。每种测定法都不是完美无缺的，都有其优缺点。在选择方法时应考虑：①实验对测定所要求的灵敏度和精确度；②蛋白质的性质；③溶液中存在的干扰物质；④测定所要花费的时间。
考马斯亮蓝法（Bradford法），由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用。”

[此贴子已经被作者于2007-6-15 10:33:26编辑过]

呵呵 如果可以直接贴出来 我就贴了 实在是太长了

希望对大家有帮助

哎 看来传说中的电位滴定法失传了

三、甲醛快速滴定蛋白法
1 原理
甲醛滴定法是测定牛乳游离氨基酸含量的一种新方法。氨基
酸含有碱性的氨基和酸性的羧基，与中性甲醛作用，生成氨基
酸二羟基衍生物，其碱性消失，可用碱来滴定羧基，测定出氨
基酸的量。牛乳中游离氨基酸的含量与蛋白质的比例较为稳
定，一般为5％（Rovoland1983,Shohaai1951）因此，可根据牛
乳氨基酸的含量，间接推算蛋白质的含量。
2 试剂配制
0.1000mol/LNaOH标准溶液：
中性饱和K2C2O4溶液：准确称取0.5g草酸钾晶体溶于100mL
中性蒸馏水中
5g/L的酚酞指示剂：准确称取0.5g酚酞溶于100mL乙醇溶液
中
36％～38％的甲醛：购市售纯甲醛
3 操作方法
精确取10mL奶样于三角瓶中，加入20mL蒸馏水摇匀，加入2
滴质量浓度为5g/L的酚酞指示剂、0.5mL中性饱和K2C2O4溶
液，摇匀后放置2min，用0.1000mol/L的NaOH标准溶液滴定至
淡红色，加入2mL体积分数为36％～38％甲醛溶液摇匀，静置
2min后再用0.1000mol/LD的NaOH滴定至淡红色。记下第二次消
耗NaOH的毫升V1。 空白实验：取30mL蒸馏水入三角瓶中，加入2ml体积分数
36%～38%的甲醛溶液，加入两滴质量浓度为5g/L的酚酞指示
剂，用浓度为0.1000mol/L的NaoH 标准溶液滴定至淡红色，记
录所消耗NaoH标准溶液的毫升数Vo。

4 结果计算

P=(V1-V0)*N*0.014*6.38*100/M*5.005

P －蛋白质的百分含量(%) ；
V1―第二次滴定消耗NaOH的毫升数（mL）；

V0―空白试验消耗NaOH的毫升数（mL）；

M―样品的质量，单位：克（g）；
N―NaOH摩尔浓度（mol/L）

补充一点，滴定法检测指标不是很准，一般只用于过程控制，不作为终产品检验。如果牛奶中有添加剂也会影响检测精度。

谢谢!!~~~~~~~~~~~~~~~~~~~