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仪器与试剂:     
LC1600高效液相色谱仪(含UV1600紫外-可见检测器1台,P1600高压恒流泵一台);AT-330色谱柱温箱;FA2004分析天平;TGL-16G-A离心机;三聚氰胺标准品(>99%);辛烷磺酸钠(色谱纯);磷酸(分析纯)、乙腈(色谱纯)、纯净水(娃哈哈)。
样品前处理:
称取2g酸奶样品与50ml具塞离心管中,加入乙腈:水=50:50混合溶液15ml,充分混匀后超声提取15min。取提取液250ul,加入0.1mol/l盐酸750ul,混匀,以12000r/min离心5min,取上清液,0.22um滤膜过滤,作为HPLC测定溶液。
加标样品同法制备。
色谱条件:     
色谱柱:Globalsil C18 5μm(ID4.6mm×250mm)
流动相:乙腈/缓冲盐=15/85(缓冲盐:10mM辛烷磺酸钠水溶液,含0.1%磷酸)
流速:1.0ml/min
波长:240nm
温度:40℃
进样量:20μl
实验结果:     
1. 三聚氰胺标准品高效液相色谱图:

图1 三聚氰胺标准品     
三聚氰胺标准品浓度为0.569μg/ml,进样5次保留时间相对标准偏差(RSD)为0.23%,峰面积RSD为0.57%。
2. 标准曲线:
配置浓度分别为0.142、0.284、0.853、1.422、7.110、14.220μg/mL的三聚氰胺标准溶液。将以上6种标准溶液在下述色谱条件下按浓度由低至高进样。

3. 实际样品高效液相色谱图:

图2 空白酸奶样品

图3 加标酸奶样品     
4. 检测限及定量限:
依据噪声值,按3倍信噪比,计算其理论检出限,为0.221 mg/kg;按10倍信噪比,计算其定量限,为0.738 mg/kg。
5. 定性定量结果:
样品中的三聚氰胺含量为1.844ug/ml,三次测定RSD为1.37%,加样回收率为87.2%。