高效液相色谱法检测还原型抗坏血酸
HPLC法的特征是：快速、简便、准确、干扰物影响小，可分别测定还原型、氧化型及Vc总量。
一、原理：样品中Vc经偏磷酸溶液提取后进样，在254nm处，还原型Vc有最大吸收峰；而氧化型Vc在此波长下无吸收。用H2S将氧化型Vc还原成还原型Vc再测定，则可得总Vc含量。
二、器材及试剂：
01、仪器：
①配备UVD的HPLC
②启普发生器
③100ml棕色容量瓶
④20ml棕色容量瓶
⑤10ml棕色容量瓶。
02、试剂：
①2%、4%偏磷酸溶液
②1mol/L乙酸钠溶液
③L-抗坏血酸标准液：精称10mgL-抗坏血酸，用2%偏磷酸溶液无损移入100ml棕色容量瓶后定容，得1ml=100μg L-抗坏血酸 标准液。
三、操作：
01、准确吸取相当于L-抗坏血酸1～5mg的样品10.0ml，移入100ml棕色容量瓶中，加入4%偏磷酸溶液10.0ml摇匀。再加入2%偏磷酸溶液至刻度，摇匀后用0.45μm水系滤膜过滤，得样品制备液A。
02、 吸取10.0ml样品制备液A，放入20ml棕色容量瓶中，用1mol/L 的NaAc调pH = 4.0～4.5，由启普发生器通入H2S约20min，用0.45μm滤膜过滤后，加水20ml，得样品制备液B。
03、走样条件：
①化学结合型硅胶柱4.5×250mm
②柱温50℃
③流动相0.025mol/L KH2PO4
/FONT>乙腈=1:1
④流速1.0ml/min
⑤波长254nm
04、标准曲线绘制：
准确吸取100μg/ml L-抗坏血酸1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0ml,分别移入10ml棕色容量瓶中，各用2%偏磷酸溶液定容，用10μl进样器分别进样，以所得峰高（或峰面积）对浓度作标准曲线。
05、样品测定：
用10μl进样器分别注入样品制备液A、B各10μl，而后从标准曲线上查出相当于标准的Vc 浓度(μg/ml)。
四、计算：
① 总Vc(mg/100ml)=CB×100×100/v×2/1000② 还原型Vc(mg/100ml)= CA× 100×100/v×1/1000
③ 氧化型Vc (mg/100ml)=（2×CB-CA）×1001×00/v×1/1000
其中：CA—样品制备液A中Vc 浓度（μg/ml）。
CB—样品制备液B中Vc 浓度（μg/ml）。
V—样品取用量（ml）。
五、注意事项：
01、对氧化型Vc进行还原时，pH过低则还原不完全，过高则Vc易分解，因而需准确调节pH。
02、启普发生器产生的H2S（盐酸+硫化铁）应先通过盛有1：3HCl溶液的洗气瓶，再经过盛水的洗气瓶洗涤后再通入样品制备液。
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