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[求助]蒽酮比色法测定粗多糖的含量 [复制链接]

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各位朋友:

    请问哪位有保健食品中粗多糖的检验方法(蒽酮硫酸法)?请提供一份给我参考。

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仅供参考:字数超了,只能删掉一些。

蒽酮比色法测糖 (选自百度百科) 

  植物在个体发育的各个时期,代谢活动也发生相应的变化,碳水化合物的代谢也不例外,其含量也随之发生变化。了解可溶性糖含量的变化,在生理上和实践上都有重要的意义。这里介绍的是蒽酮比色法,糖在硫酸的作用下生成糖醛,糖醛再与蒽酮作用,形成一种绿色的络合物,颜色的深浅与糖含量有关。方法简便,但没有志一性,对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应,产生颜色。                 

  仪器药品                 

  721型分光光度计 分析天平                 

  研钵 恒温水浴锅                 

  烧杯 容量瓶                 

  三角烧瓶 大试管                 

  移液管 漏斗                 

  乙醚 草酸钠                 

  饱和醋酸铅                 

  葡萄糖标准溶液:称取已在80℃烘箱中烘至恒重的葡萄糖100mg,配制成500ml溶液,即得每ml含糖为200μg的标准溶液。                 

  蒽酮试剂:称取1g经过纯化的蒽酮,溶解于1000ml硫酸中即得。硫酸溶液由760ml硫酸(比重1.84)稀释成1000ml而成。                 

  操作步骤                 

  1.可溶性糖的提取                 

  称取重约5g的新鲜植物叶子,于研钵中乙醚少许,仔细研磨成均匀的浆状物,倒入烧杯中,用70℃热水洗涤研钵,洗液并入烧杯中,再加蒸镏水30─40ml。将烧杯放在水浴锅中加热,保持温度70─80℃约半小时,冷却后11滴地加入饱和中性醋酸铅,以除去蛋白质,直至加入醋酸铅时不再形成白色沉淀为止。然后将此混合物连同残渣一并洗入100ml容量瓶中,加水至刻度,充分振荡。以干燥漏斗将滤液过滤于一干燥的三角烧瓶中,瓶中事先放有少量(约0.2─0.4g)草酸钠粉末,以除去滤液中过量的醋酸铅,使生成草酸铅沉淀,再行过滤,所得的透明滤液即为可溶性糖提取液。

  2.显色及比色                 

  吸取上述糖提取液1ml,放入一干洁的试管中,加蒽酮试剂5ml混合之,于沸水浴中煮沸10分钟,取出冷却,然后于分光光度计上进行测定,波长为625nm,测得吸光度。从标准曲线上查得滤液中的糖含量(或经直线回归公式计算),然后再行计算样品中含糖百分数。                 

  3.绘制标准曲线                 

  取标准葡萄糖溶液将其释成一系列不同浓度的溶液,浓度分别为每ml含糖05102030405060708090100μg。按上述方法分别测得其吸光度,然后绘制A026-糖浓度曲线,或进行直线回归求得直线方程。                 

  4.计算样品中含糖%

  设V为植物样品稀释后的体积(ml)

  C为提取液的含糖量(μg/ml)

  W为植物组织鲜重(g)

  则得计算式如下: %=C×V/W×1000000×100

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