厌氧培养（anaerobic culture）指把微生物置于与分子态氧隔绝状态下所进行的培养。适用于兼性厌氧菌和专性厌氧菌。由于目的不同而有不同的培养方法，可分为以下几大类： 　　（1）与空气隔绝或尽量少接触空气的培养法：在三角瓶瓶颈以下装满液体培养基，通过煮沸把溶解的空气赶出后，立即冷却进行细菌接种。由于发酵而产生H2和CO2时，就可进一步确认是厌氧细菌。另外，把琼脂培养基加入普通试管约10厘米高度进行穿刺培养，或移植于液体培养基和固体斜面培养基上以后，再加一层液体石腊或矿物油，用这些方法可防止与空气接触。 　　（2）除掉空气的方法：把微生物装入耐压容器中进行真空培养，或充满二氧化碳、氢气、氮气、氩气等。这些气体可把事先混入的微量氧气除掉。在氢存在时，可用置换后飞溅火花等方法来除掉残存的氧气 　　（3）去氧的方法：使用碱性邻苯 三酚（pyrogallol） 、黄磷、金属铬和稀硫酸进行化学除氧，或使用好氧细菌及发芽的种子，使通过呼吸而消耗掉氧气。 　　（4）在培养基中加入还原剂（如0.1%的巯基乙酸钠盐，0.01%的硫化钠等）。以上各种方法进行适当组合就能进一步确认厌氧细菌。为了确定厌氧性，可在碱性条件下加入葡萄糖并加热，与配制的还原型次甲蓝（美蓝）溶液一起加入，保持脱色状态即可。