4.11 甲醇
4.11.1 气相色谱法
4.11.1.1 原理
试样被气化后,随同载气进入色谱柱,利用被测定的各组分在气液两相中具有不同的分配系数,在柱内形成迁移速度的差异而得到分离。分离后的组分先后流出色谱柱,进入氢火焰离子化检测器,根据色谱图上各组分峰的保留值与标样相对照进行定性;利用峰面积(或峰高),以内标法定量。
4.11.1.2 试剂和材料
4.11.1.2.1乙醇,色谱纯。配成10%(体积分数)乙醇水溶液。
4.11.1.2.2甲醇,色谱纯。作标样用。2%溶液(体积分数,用10%乙醇水溶液配制)。
4.11.1.2.3 4-甲基-2-戊醇,色谱纯。作内标用。2%溶液(体积分数,用10%乙醇水溶液配制)。
4.11.1.3 仪器和设备
4.11.1.3.1 气相色谱仪,备有氢火焰离子化检测器(FID)
4.11.1.3.2 毛细管柱:PEG 20M毛细管色谱柱(柱长35m~50m, 内径0.25mm, 涂层0.2μm),或其他具有同等分析效果的色谱柱。
4.11.1.3.3 微量注射器:1μL;
4.11.1.3.4 全玻璃整流器:500mL。
4.11.1.4 分析步骤
4.11.1.4.1 色谱参考条件
载气(高纯氮):流速为0.5 mL/min~1.0mL/min,分流比:约50:1,尾吹约20 mL/min~30mL/min;
氢气:流速为40mL/min;
空气:流速为 400mL/min;
检测器温度(TD):220℃;
注样器温度(TJ):220℃;
柱温(TC):起始温度40℃,恒温4min,以3.5℃/min程序升温至200℃,继续恒温10min。
载气、氢气、空气的流速等色谱条件随仪器而异,应通过试验选择最佳操作条件,以内标峰与酒样中其他组分峰获得完全分离为准。
4.11.1.4.2 校正因子(f值)的测定
吸取2%甲醇标准溶液(5.11.2.2)1.00mL,移入100mL容量瓶中,然后加入2%内标液1.00 mL,用10%乙醇溶液稀释至刻度。上述溶液中甲醇和内标的浓度均为0.02% (体积分数)。待色谱仪基线稳定后,用微量注射器进样,进样量随仪器的灵敏度而定。记录甲醇和内标峰的保留时间及其峰面积(或峰高),用其比值计算出甲醇的相对校正因子。
4.11.1.4.3 试样的测定
用一洁净、干燥的 100 mL容量瓶准确量取100mL样品(液温 20℃)于 500 mL蒸馏瓶中,用 50mL水分三次冲洗容量瓶,洗液并入蒸馏瓶中,再加几颗玻璃珠,连接冷凝器,以取样用的原容量瓶作接收器(外加冰浴)。开启冷却水,缓慢加热蒸馏。收集馏出液接近刻度,取下容量瓶,盖塞。于 20 ℃水浴中保温 30 min,补加水至刻度,混匀,备用。
吸取上述方法制备的试样10.0mL于10mL容量瓶中,加入2%内标液0.10mL,混匀后,在与f值测定相同的条件下进样,根据保留时间确定甲醇峰的位置,并测定甲醇与内标峰面积(或峰高),求出峰面积(或峰高)之比,计算出酒样中甲醇的含量。
4.11.1.5 分析结果的表述
式中: ──试样中甲醇的含量,mg/L;
──甲醇的相对校正因子;
──标样f值测定时内标的峰面积(或峰高);
──标样f值测定时甲醇的峰面积(或峰高);
──试样中甲醇的峰面积(或峰高);
──添加于酒样中内标的峰面积(或峰高);
──甲醇的相对密度;
──内标物的相对密度;
──内标物含量(添加在酒样中),mg/L。
所得结果应表示至整数。
4.11.1.6 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10% 。
4.11.2 比色法
4.11.2.1 原理
甲醇经氧化成甲醛后,与品红亚硫酸作用生成蓝紫色化合物,与标准系列比较定量。
4.11.2.2 试剂和材料
4.11.2.2.1 高锰酸钾-磷酸溶液:称取3g高锰酸钾,加入15mL磷酸(85%)与70mL水的混合液中,溶解后加水至100mL。贮于棕色瓶内,防止氧化力下降,保存时间不宜过长。
4.11.2.2.2 草酸-硫酸溶液:称取5g无水草酸(H2C2O4)或7g含2分子结晶水草酸(H2C2O4•2H2O),溶于硫酸(1+1)中至100mL。
4.11.2.2.3 品红-亚硫酸溶液:称取0.1g碱性品红研细后,分次加入共60mL80℃的水,边加入水边研磨使其溶解,用滴管吸取上层溶液滤于100mL容量瓶中,冷却后加10mL亚硫酸钠溶液(100g/L),1mL盐酸,再加水至刻度,充分混匀,放置过夜,如溶液有颜色,可加少量活性炭搅拌后过滤,贮于棕色瓶中,置暗处保存,溶液呈红色时应弃去重新配制。
4.11.2.2.4 甲醇标准溶液:称取1.000g甲醇,置于100mL容量瓶中,加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于10mg甲醇。置低温保存。
4.11.2.2.5 甲醇标准使用液:吸取10.0mL甲醇标准溶液,置于100mL容量瓶中,加水稀释至刻度。再取10.0mL稀释液置于50mL容量瓶中,加水至刻度,该溶液每毫升相当于0.50mg甲醇。
4.11.2.2.6 无甲醇的乙醇溶液:取0.3mL按操作方法检查,不应显色。如显色需进行处理。取300mL乙醇(95%),加高锰酸钾少许,蒸馏,收集馏出液。在馏出液中加入硝酸银溶液(取1g硝酸银溶于少量水中)和氢氧化钠溶液(取1.5g氢氧化钠溶于少量水中),摇匀,取上清液蒸馏,弃去最初50mL馏出液,收集中间馏出液约200mL,用酒精密度计测其浓度,然后加水配成无甲醇的乙醇(60%)。
4.11.2.2.7 亚硫酸钠溶液(100g/L)。
4.11.2.3 仪器
分光光度计
4.11.2.4 分析步骤
用一洁净、干燥的 100 mL容量瓶准确量取100mL样品(液温 20℃)于 500 mL蒸馏瓶中,用 50mL水分三次冲洗容量瓶,洗液并入蒸馏瓶中,再加几颗玻璃珠,连接冷凝器,以取样用的原容量瓶作接收器(外加冰浴)。开启冷却水,缓慢加热蒸馏。收集馏出液接近刻度,取下容量瓶,盖塞。于 20 ℃水浴中保温 30 min,补加水至刻度,混匀,备用。
根据样品乙醇浓度适吸取按上述方法制备的试样(乙醇浓度10%,取1.4mL;乙醇浓度20%,取1.2mL)。置于25mL具塞比色管中。
吸取0,0.10,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00mL甲醇标准使用液(相当于0,0.05,0.10,0.20,0.30,0.40,0.50mg甲醇)分别置于25mL具塞比色管中,并用无甲醇的乙醇稀释至1.0mL。
于样品管及标准管中各加水至5mL,再依次各加2mL高锰酸钾-磷酸溶液,混匀,放置10min,各加2mL草酸-硫酸溶液,混匀使之褪色,再各加5mL品红-亚硫酸溶液,混匀,于20℃以上静置0.5h,用2cm比色杯,以零管调节零点,于波长590nm处测吸光度,绘制标准曲线比较,或与标准色列目测比较。
4.11.2.5 分析结果的表述
式中:
―― 样品中甲醇的含量,mg/L;
―― 测定样品中甲醇的质量,mg;
――样品体积,mL。
所得结果保留至整数。
4.11.2.6 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10% 。
4.12 抗坏血酸(维生素C)
4.12.1 原理
还原型抗坏血酸能还原2,6-二氯靛酚染料。该染料在酸性溶液中呈红色,被还原后红色消失。还原型抗坏血酸还原染料后,本身被氧化为脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时,一定量的样品提取液还原标准染料的量与样品中所含抗坏血酸的量成正比。
4.12.2 试剂和材料
4.12.2.1 草酸溶液 10 g/L:溶解 20 g结晶草酸于 700 mL水中,然后稀释至 1 000mL后,取该溶液500 mL,用水稀释至 1000 mL。
4.12.2.2 碘酸钾溶液0.1 mol/L:按GB/T 601配制与标定。
4.12.2.3 碘酸钾标准溶液0.001 mol/L:吸取1 mL0.1 mol/L碘酸钾溶液,用水稀释至 100 mL。此溶液1 mL相当于 0.088 μg抗坏血酸。
4.12.2.4 碘化钾溶液 60 g/L。
4.12.2.5 过氧化氢溶液 3%:吸取 5 mL 30%过氧化氢溶液,稀释至 50 mL(现用现配)。
4.12.2.6 抗坏血酸标准贮备液 2 g/L:准确称取 0.2 g(准确至 0.000 1 g)预先在五氧化二磷干燥器中干燥 5 h的抗坏血酸,溶于草酸溶液中,定容至 100 mL(置冰箱中保存)。
4.12.2.7 抗坏血酸标准使用液 0.020 g/L:吸取 10 mL抗坏血酸标准贮备液,用 10 g/L草酸溶液定容至 100 mL。
标定:吸取标准使用液5 mL于三角烧瓶中,加入0.5 mL碘化钾溶液、3滴淀粉指示液,用碘酸钾标准溶液滴定至淡蓝色,30 s内不变色为其终点。
结果计算:
式中:c1――抗坏血酸标准使用液的浓度,g/L;
V1――滴定时消耗的碘酸钾标准溶液的体积,mL;
V2――抗坏血酸标准使用液的体积,mL;
0.088――1 mL碘酸钾标准溶液相当于抗坏血酸的量,g/L。
4.12.2.8 2,6-二氯靛酚标准溶液:称取 52 mg碳酸氢钠,然后加入0.05 g 2,6-二氯靛酚,混匀,冷却,置于冰箱中放置 24 h。然后过滤置于 250 mL容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀。此液应贮于棕色瓶中并冷藏。每星期至少标定1次。
标定:吸取5 mL抗坏血酸标准使用溶液,加入草酸溶液,摇匀,用 2,6-二氯靛酚标准溶液滴定至溶液呈粉红色,30 s不褪色为其终点。
结果计算:
式中:c2――每毫升2,6-二氯靛酚标准溶液相当于抗坏血酸的毫克数(滴定度),g/L;
c1――抗坏血酸标准使用液的浓度,g/L;
V1――滴定用抗坏血酸标准使用溶液的体积,mL;
V2――标定时消耗的2,6-二氯靛酚标准溶液体积,mL。
4.12.2.9 淀粉指示液 10 g/L:按GB/T 603配制。
4.12.3 分析步骤
准确吸取 5.00 mL样品于 100 mL三角瓶中,加入 15 mL草酸溶液、3滴过氧化氢溶液,摇匀,立即用2,6-二氯靛酚标准溶液滴定,至溶液恰成粉红色,30 s不褪色即为终点。
注:样品颜色过深影响终点观察时,可用白陶土脱色后再进行测定。
4.12.4 结果计算
式中:X――样品中抗坏血酸的含量,g/L;
c2――每毫升2,6-二氯靛酚标准溶液相当于抗坏血酸的毫克数(滴定度),g/L;
V――滴定时消耗的2,6-二氯靛酚标准溶液的体积,mL;
V1――取样体积,mL。
所得结果表示至整数。
4.12.5精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10% 。