3.1 消化
3.1.1凯氏定氮法的误差，主要因消化操作的条件而产生，因此要格外注意。
3.1.2量取的样品倒入凯氏烧瓶时，不要将样品粘在瓶颈上，以免加入消化液后试样炭化粘在瓶颈上消化不彻底．消化过程中要逐渐升温，当低温加温至出现带有硫酸的白色气体后，才可升温使溶液沸腾，但应避免剧烈沸腾。
3.1.3消化过程中，消化液体积不可蒸至少于原来的三分之二，更不可蒸干，若硫酸损失过多，应酌量补加硫酸。若取样量较大，如干待测样超过5克，可按每克试样5毫升的比例增加硫酸用量。
3.1.4当样品消化液不易澄清透明时，可将凯氏烧瓶冷却，加入30%双氧水2-3毫升后再继续加热消化。但在消化后期不得加入，因此消化液中还原物质（如：碳）含量减少，氧化剂易造成氨进一步氧化为氮逸出，使测定结果偏低。
3.1.5消化液澄清后，必须继续加热沸腾三十分钟，以提高氮的回收率，若催化剂中有硒存在，加热时间过长也可能使氮素损失。一般情况下，纯牛奶需消化4.5小时即可。
3.2蒸馏
3.2.1．消化液加蒸馏水稀释后，应及时蒸馏，否则应保存消化液，临用时再加蒸馏水稀释．反应室加入碱液后，应立即盖塞并加水封，注意各接头处的密封情况，防止漏气。
3.2.2 甲基红-溴甲酚绿混合指示剂必须于临用前按比例混匀，其在碱性溶液中呈绿色，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶液中呈红色。
3.2.3．蒸馏时，加入的氢氧化钠溶液除与硫酸铵作用外，还与消化液中的硫酸和硫酸铜作用．反应式：
2NaOH+H2SO4 ->Na2SO4+2H2O
2NaOH+CuSO4 ->Na2SO4+Cu(OH)2
Cu(OH)2 ->CuO +Cu(OH)2
若加入的氢氧化钠不够，则溶液呈蓝色，不生成褐色的氢氧化铜沉淀．所以，加入的氢氧化钠必须过量，并且动作还要迅速，以防止氨的流失。
3.2.4．蒸气发生瓶内的水装至三分之二体积并且保持酸性（在蒸气发生瓶内的水中加入稀硫酸，使之呈酸性，内加甲基橙指示剂数滴，水应呈橙红色，如变黄时，应该补加酸），以防止在碱性条件水中游离氨蒸出，使结果偏大。
3.2.5．因蒸馏时反应至外层的气压大于反应室内的压力，而反应室的压力大于大气压力，故可将氨带出。所以，蒸馏时，蒸气要发生均匀，充足，蒸馏中不得停火断气，否则，会发生倒吸。停止蒸馏时，由于反应室外层的压力突然降低，可使液体倒吸入反应室外层，所以，操作时，应先将冷凝管下端提高液面并清洗管口，再蒸一分钟后关掉热源。蒸馏是否完全，可用精密ＰＨ试纸测冷凝管口的冷凝液来测定，中性则说明已蒸馏完全。
3.2.6 在盐酸标准溶液的配制时，必须将基准无水碳酸钠于270-300℃灼烧至恒重后称取所须用量，否则也会影响蛋白质测定结果的准确性。
