开堂食品卫生检验课 [复制链接]

以上为2006-06-30日更新。下章为第五章 常见病原微生物的检测。

第五章 常见病原微生物的检测

第一节禽流感病毒

禽流感是禽流行性感冒（AvianInfluenza，AI）的简称，这是一种由甲型流感病毒的一种亚型引起的传染性疾病综合征，被国际兽疫局定为Ａ类传染病，又称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟。

 不仅是鸡，其它一些家禽和野鸟都能感染禽流感。按病原体的类型，禽流感可分为高致病性、低致病性和非致病性三大类。非致病性禽流感不会引起明显症状，仅使染病的禽鸟体内产生病毒抗体。低致病性禽流感可使禽类出现轻度呼吸道症状，食量减少、产蛋量下降，出现零星死亡。最近国内外由H5N1血清型引起的禽流感称高致病性禽流感，发病率和死亡率高，感染的鸡群常常“全军覆没”。发病率和死亡率都很高，危害巨大。

最早的禽流感记录在１８７８年，意大利发生鸡群大量死亡，当时被称为鸡瘟。到１９５５年，科学家证实其致病病毒为甲型流感病毒。此后，这种流行性疾病被更名为禽流感。就最近５年的记录，１９９９年３月至１１月，英国伦巴第地区暴发禽流感，到次年３月１３００万只病禽被捕杀。２００２年１０月，美国加州暴发禽流感，当年１２月疫情扩散到内华达州和亚利桑那州。到２００３年３月，仅加州就销毁３２６多万只鸡；４月，荷兰发生禽流感，人类感染者达８０人，并出现死亡病例。自２００３年１２月以来，禽流感在亚洲十多个国家和地区肆虐，造成数千万只家禽被宰杀销毁，染病死亡者已达数十人。禽流感被发现１００多年来，人类并没有掌握有效的预防和治疗方法，仅能以消毒、隔离、大量宰杀禽畜的方法防止其蔓延。高致病性禽流感暴发的地区，往往蒙受巨大经济损失。

一、生物学特性
        1、形态学特点

禽流感病毒是正粘病毒，流感病毒属的一个成员。

禽流感病毒具有A型抗原,属于A型流感毒,列为禽流感病毒类。本病毒颗粒呈球形、杆状或长丝状,为多形性。其直径为80－120nm,表面有一层棒状和蘑菇状的纤突，有囊膜,囊膜下面有一层膜蛋白,紧紧地包裹着呈螺旋状对称的核衣壳。

2、禽流感病毒的分型

流感病毒分为三个不同的抗原型,即A、B、C三型。其中B、C两型仅能对人致病,A型可对人、猪、马和禽致病。

依据病毒表面的两种糖蛋白血凝素〈HA〉和神经氨酸酶〈NA〉可将A型流感病毒分成若干亚型。目前已有15种HA和9种NA。

A型禽流感各亚型毒株对禽类的致病力是不同的。历史上高致病性的禽流感都是由H5和H7引起的，但并非H5和H7都是强毒。A型流感病毒的抗原性不断发生变异，这种变异是由HA和NA引起的，尤其是HA的变异最为常见。来自不同宿主的病毒也易发生基因置换。病毒的这一特征,加之感染动物复杂,使本病的防治难度加大，这也是流行了一个世纪的禽流感至今仍无良好的治疗和防治措施的主要原因.
 3、抵抗力

对热的抵抗力较低，60℃10分钟，70℃2分钟即可致弱，普通消毒剂能很快将它杀死。

低温冻干或甘油保存可使病毒存活多年。

4、流行病学

禽流感在家禽中以鸡和火鸡及某些野禽的易感性最高，并呈急性致死性传染病。

鸭、鹅及其它水禽类的易感性较差，多为隐性感染或带毒，有时也能大批死亡。鸽子可带毒，但很少自然发病。

迄今对本病的流行病学知识了解得不十分清楚，一般认为是带毒的候鸟将其作世界性传播。已证明在野鸭的肠道中可存在病毒。我国学者韩冲与徐为燕等〈1980〉在南京鸡鸭加工厂的外观健康的鸭群随机取86只鸭泄殖腔棉拭子进行检查,以接种鸡胚和血清学方法，证实其中15例分离出了A型流感病毒；这些结果均说明在自然界中存大有大量的禽流感病毒,带毒的野禽能将病毒大量排出于体外,通过不同途径将其传播给鸡和火鸡。

强毒可使易感家禽直接发病,弱毒可在家禽体内反复传代增殖，发生变异为强毒。

1992年以来世界发生禽流感的状况：从1991年10月至1997年3月间公开报导发生高致病性禽流感的国家有澳大利亚〈H7N3〉,巴基斯坦〈H7N3〉和墨西哥(H5N2〉,此外其它在东半球分离到的毒株,均为低致病性的。意大利、德国在分别从鸡体分离出H9N2型,其它来自鸡的毒株分别是南非1992年H7N1型,1994年H5N9型，法国1995年H6N5型，意大利1995年-H3N2型,西半球的加拿大分别于1991、1992、1995、1996年报导火鸡和平胸鸟发生禽流感，而H6亚型最为普遍。美国从国内的家禽中尚未分离到高致病性流感病毒，H1N1亚型最为普遍，至少以9个州分离到这个毒株。 

1993年,禽流感病毒又袭击了笼养鸟。法国、英国、南非、赛浦路斯、意大利相继报导从笼养鸟中分离到H4N6亚型禽流感病毒.

5、临床症状和病理变化

禽流感的症状极为复杂.根据禽类的种类〈鸡、火鸡、鸭、鹅及野鸟等〉以及病毒的亚型类别的不同，表现各种各样的变化：有最急性、急性、亚急性及隐性感染等。

潜伏期一般较短，通常为4－5天，体温急剧上升至43.3－44.4.c，精神沉郁、拒食、病鸡很快陷于昏睡状态，有些颈部出现向后扭转的神经症状。病鸡多呈急性死亡，有的也可能出现呼吸道症状，咳嗽、打喷嗖，气管出现咯音，流泪等症状，羽毛蓬松，产蛋率下降，死亡率高低不等。

二、诊断
  1、病原的分离

病原的分离和鉴定可以从活体或尸体分离病毒。

用棉拭子法常可从活体的气管和泄殖腔中分离到病毒，可用不同大小的棉拭子擦取气管或泄殖腔，然后将拭子放入灭菌的保存液〈25－50%甘油盐水、肉汤或1000u/ml青霉素和10mg/mL链霉素的细胞维持液〉中。

病料的采取时间很重要,一般在感染初期或发病急性期采取。如转为后期则因机体已形成足够的抗体而不易分离到病毒.

2、病毒分离

通常用鸡胚来进行。

接种9－10日龄鸡胚尿囊腔，继续孵育48－72h。

如材料中含有病毒时，则接种48h鸡胚死亡，但在多数情况下初代分离时鸡胚多不死，为此需将经72h未死的鸡胚置冰箱内冻死后，收集尿囊液作第二代接种。如第二代接种的鸡胚仍不死亡，即可判定分离病毒为阴性。

3、血清学试验

三、介绍高致病性禽流感的其他知识

鉴定高致病性禽流感的标准br/>    最近国际上评价禽流感病毒致病力的经典方法是接种易感鸡。按照国际标准，能引起接种鸡死亡75％以上的分离株，是高致病性毒株。尽管接种鸡是确定致病的“黄金标准”，但它不能反应致死率小于75%的H5或H7亚型病毒的潜在致病力。因此0IE(国际兽疫局〉根据科学家的建议,推出新鉴定标准。
    1 任何分离到A型流感病毒，用0.2mL1:10稀释的无菌尿囊液静脉或肌肉注射8只4－8周龄易感鸡,10天内的死亡率不低于75%。
    2.对所有低致病的H5、H7毒株,血凝素切割位点的氨基酸序列与高致病性禽流感病毒一致。
    3.H5、H7以外的A型流感病毒,可以致死1－5只鸡,在缺乏胰蛋白酶的情况下,能在CEF细胞上生长形成蚀斑。
本病的防治
    根据世界各国对禽流感的防治经验，由于病毒抗原的多变性，因此目前用疫苗进行预防，其免疫效果尚存在一定问题。

本病在某些国家的局部地区虽仍有发生，但由于采取严格的防治措施，得到了很好的控制。因此在怀疑有本病发生时，应尽快作出确证，采取严格的隔离封锁和同群扑杀等综合措施,方能达到有效的控制。

禽流感的传播途径是什么？

禽流感的传播有病禽和健康禽直接接触和病毒污染物间接接触两种。

禽流感病毒存在于病禽和感染禽的消化道、呼吸道和禽体脏器组织中。因此病毒可随眼、鼻、口腔分泌物及粪便排出体外，含禽病毒的分泌物、粪便、死禽尸体污染的任何物体，如饲料、饮水、鸡舍、空气、笼具、饲养管理用具，运输车辆、昆虫以及各种携带病毒的鸟类等均可机械性传播。健康禽通过呼吸道和消化道感染，引起发病。

如何防范禽流感

禽流感被国际兽疫局定为Ａ类传染病，且变异后的病毒能威胁人类健康，但各国专家们说，及时、适当的预防措施可以使人类避免感染。

    世界卫生组织最近发表的报告说，与病禽接触是禽流感病毒可能入侵人体的最主要途径之一，鲜活家禽市场可能是病毒传播的重要场所。因此，避免直接接触病禽及其排泄物、分泌物等能有效防止感染病毒。

    世卫组织还建议，饲养员、屠宰工人等经常与活禽密切接触的人，必须做好保护工作，包括穿防护服、佩戴防护用具、及时接种流感疫苗、工作前后彻底消毒等。

    注重自身健康、保持良好的免疫力也是避免感染禽流感病毒的有效措施。在日常生活中，特别是在流感易暴发的季节，人们应注意多摄入一些富含维生素Ｃ等增强免疫力的食物和药物，并适当地进行体育锻炼，以增加机体对病毒的抵抗能力。

    韩国、日本等出现疫情的国家规定，一旦发现禽流感疫情，有关部门要对疫点、疫区和受威胁区进行封锁。对疫点周围３公里范围内的所有禽类全部扑杀并安全掩埋，对疫区周围５公里范围内所有禽类按规定标准进行强制免疫，并做好消毒工作。越南和日本等国专家还建议宰杀疫区内的全部家禽。

    各国的权威专家已认定，食用烹熟的家禽肉、蛋不会传染禽流感。

禽流感与其他流感有什么关系？

除禽流感以外，常见的流感还有人流感、马流感和猪流感等。禽流感与人流感和人类健康的关系非常密切。由于猪与人的种间差异较小，禽流感病毒可以在中间宿主(猪)体内与人流感病毒杂交，并产生能感染人的新的流感病毒。

禽流感病毒为何消灭不了？

流感病毒为了生存而不断发生变异，以逃脱动物产生的特异性抵抗力。人们为了预防禽流感也研制出了各种疫苗。但机体在产生特异性抗体后，病毒为逃脱机体的扑杀而不断地发生着变异，这样原有的抗体即失去作用，病毒就可使动物重新发病。因此就目前的防疫技术和手段而言，禽流感病毒是消灭不了的。

第二节疯牛病病毒

今年71岁的美国得克萨斯州妇女伯内尔·贝兹上月去世，而医生怀疑她可能感染了疯牛病病毒。

　　据美联社报道，贝兹因患罕见的“克雅氏症”于10月16日去世。这种病有两种形式。第一种被称为变异型克雅氏症，与疯牛病有关，是由人食用了患有牛海绵状脑病的牛的神经组织引起的，这种病能在人际间传染。另一种较普遍的被称为普通克雅氏症，每年全美大约有1万人死于这种疾病，其中85％原因不明。

　　贝兹的家人也不清楚她是否食用了患疯牛病的牛肉，因此非常担心。据她的家人说，贝兹是今年夏末患病的，在生命最后时刻，她一直处于昏迷状态。据悉，美国国家普里昂疾病病理监测中心将对贝兹的脑部进行解剖，确定她是得了变异型还是普通克雅氏症，结果将于2周内公布。

　　今年6月，佛罗里达州一名妇女因患变异型克雅氏症去世，这也是美国目前唯一一例已知的变异型克雅氏症致人死亡的病例，其家人认为她是十多年前在英国吃了疯牛病牛肉而感染此病的。

一、认识疯牛病
　　牛海绵状脑病（Bovine spongiform encephalopathy, BSE），又称疯牛病，是一种侵犯牛中枢神经系统的慢性的致命性疾病，由一种非常规的病毒——朊病毒（Prion）引起的一种亚急性海绵状脑病，这类病还包括绵羊的痒病、人的克-雅氏病（Creutzfeldt-Jakob Syndrome , CJD）（又称早老痴呆症）以及最近发现的致死性家庭性失眠症等等。共同特征是：生物体的认知和运动功能严重衰退直至死亡。其中人的克-雅氏病是一种罕见的主要发生在50-70岁的可传播的脑病，产生的危害极大。
　　1996年3月20日，英国政府宣布，英国20余名克-雅氏病患者与疯牛病传染有关，引起世界的震惊。为此，英国将疯牛病疫区的1100多万头牛屠宰处理，造成了约300亿美元的损失，并引起了全球对英国牛肉的恐慌。
　　据英国《泰晤士报》2000年3月5日报道出生的一名婴儿可能是世界上第一例通过母体感染疯牛病的患者。这名婴儿一出生医生就发现他患有疯牛病。事实上，生产这名婴儿的孕妇已是疯牛病患者。扫描显示，这名妇女大脑纤维组织出现疯牛病患者的典型损坏症状。这一消息证实，疯牛病可通过孕妇胎盘垂直传播，是典型的遗传

二、认识朊病毒
　　 朊病毒是一类非正常的病毒，它不含有通常病毒所含有的核酸，而是一种不含核酸仅有蛋白质的蛋白感染因子。其主要成分是一种蛋白酶抗性蛋白，对蛋白酶具有抗性。正因为这种结构特点，使其具有易溶于去污剂、有致病力和不诱发抗体等特性，给患病动物及人类的诊断和防治带来很大麻烦，给人类和动物的健康和生命带来严重的威胁。
　　 朊病毒颗粒耐高温，即使加热到360℃仍有感染力，植物油的沸点（160℃一170℃）也不足以灭活，耐甲醛、强碱；朊病毒颗粒对一些理化因素的抵抗力之强，大大高于已知的各类微生物和寄生虫，其传染性强、危害性大的特性极不利于人类和动物的健康。
　　 法国专家发现，导致疯牛病等疾病的朊病毒从一类动物传染给另一类动物后，即这种病毒跨物种传播后，其毒性更强，潜伏期更短。
　　 三、症状
　　 临床表现为脑组织的海绵体化、空泡化，星形胶质细胞和微小胶质细胞的形成以及致病型蛋白积累，无免疫反应。
　　 病原体通过血液进入人的大脑，将人的脑组织变成海绵状，如同糨糊，完全失去功能。
　　 受感染的人会出现睡眠紊乱、失语症、肌肉萎缩和进行性痴呆等症状，并且会在发病的一年内死亡。该病有常染色体家族遗传倾向，并且有一个新的克雅氏病的报道（该病与牛海绵状脑病有潜在的联系）。此病的病理学特征包括以小脑和大脑皮层为主的海绵样变性和朊病毒的出现。

　　 四、疯牛病的传染与防治
　　 牛的感染过程通常是：被疯牛病病原体感染的肉和骨髓制成的饲料被牛食用后，经胃肠消化吸收，经过血液到大脑，破坏大脑，使失去功能呈海绵状，导致疯牛病。
　　 人类感染通常是因为下面几个因素：
1、食用感染了疯牛病的牛肉及其制品也会导致感染，特别是从脊椎剔下的肉（一般德国牛肉香肠都是用这种肉制成）；
2、某些化妆品除了使用植物原料之外，也有使用动物原料的成分，所以化妆品也有可能含有疯牛病病毒（化妆品所使用的牛羊器官或组织成分有：胎盘素、羊水、胶原蛋白、脑糖）；
3、而有一些科学家认为“疯牛病”在人类变异成“克-雅氏病”的病因，不是因为吃了感染疯牛病的牛肉，而是环境污染直接造成的。认为环境中超标的金属锰含量可能是“疯牛病”和“克-雅氏病”的病因。
　　 现在对于疯牛病的处理，还没有什么有效的治疗办法，只有防范和控制这类病毒在牲畜中的传播。一旦发现有牛感染了疯牛病，只能坚决予以宰杀并进行焚化深埋处理。但也有看法认为，即使染上疯牛病的牛经过焚化处理，但灰烬仍然有疯牛病病毒，把灰烬倒在堆田区，病毒就可能会因此而散播。
　　 目前，对于这种毒毒究竟通过何种方式在牲畜中传播，又是通过何种途径传染给人类，研究的还不清楚。

第三节布鲁氏杆菌

布氏杆菌属（Brucella）是一类革兰氏阴性的短小杆菌，牛、羊、猪等动物最易感染，引起母畜传染性流产。人类接触带菌动物或食用病畜及其乳制品，均可被感染。布氏杆菌病广泛分布世界各地。我国部分地区曾有流行，现已基本控制。

布氏杆菌也是帝国主义者列为失能性生物战剂之一。布氏杆菌属分为羊、牛、猪、鼠、绵羊及犬布氏杆菌6个种，20个生物型。我国流行的主要是羊、牛、猪三种布氏杆菌，其中以羊布氏杆菌病最为多见。病畜为传染源，人患病主要由畜传染，人与人之间传染机会极少。经消化道、呼吸道、生殖器官、眼结膜和损伤皮肤都可感染。 布氏杆菌病已不是以往认为只是发生在牧区和山区，而在城市和农区也有发生。

一、生物学性状

1、形态染色

本菌属初次分离培养时多呈小球杆状，毒力菌株有荚膜，经传代培养渐呈杆状，革兰氏染色阴性。

2、培养特性

本菌为严格需氧菌。

牛布氏杆菌在初次分离时，需在5～10%CO2环境中才能生长，最适温度37℃，最适的pH6.6～7.1,营养要求高，生长时需硫胺素，烟草酸和生物素，泛酸钙等，实验室常用肝浸液培养基或改良厚氏培养基。

此菌生缓慢，培养48小时后才出现透明的小菌落，鸡胚培养也能生长。

3、抵抗力

在自然界中抵抗力较强，在病畜的脏器和分泌物中，一般能存活4个月左右，在食品中约能生存2个月。对低温的抵抗力也强，对热和消毒剂抵抗力弱。对链霉素、氯霉素和四环素等均敏感。

　　二、致病性和免疫性

本菌侵入人体后，被吞噬细胞吞噬，由于本菌具有荚膜，能抵抗吞噬细胞的吞噬消毁，并能在该细胞内增殖。反复出现菌血症。由于内毒素的作用，病人出现发热、无力等中毒症状，血流中细菌逐步消失，体温也逐渐消退。细菌在细胞内繁殖至一定程度时，再次进入血流又出现菌血症，体温再次上升，反复呈波浪热型。

本菌多为细胞内寄生，治疗难于彻底，易转为慢性及反复发作，在全身各处引起迁徒性病变。

布氏杆菌喜欢在生殖器官――子宫和宰九中繁殖，特别偏爱怀孕子宫，致使胚胎绒毛发生坏死，胎儿胎盘与母体胎盘松动，引起胎儿死亡或流产。

布氏杆菌病最危险之点是患畜几乎不表现症状，但能通过分泌物和排泄物(乳、精子、阴道分泌物、粪、尿)不断向外排菌，待别是随流产胎儿、胎衣和羊水排出大量病原菌，成为最危害的传染源。排出的病原菌对外界环境有相当强的抵抗力，如在胎衣中能存活4个月，在水、土、粪、尿中存活3个月，在皮毛上存活1-4个月，在冻肉中存活2-7周，在乳中存活10天至1年。因此生活和生产环境--旦遭病原污染。不论人或畜，在几个月内部有被感染的可能。

　　　三、主要症状

人感染布氏杆菌较家畜严重，病情复杂，表现乏力，全身软弱，食欲不振，失眠，咳嗽，有白色痰，可听到肺部干鸣，多呈波浪热，也有稽留热、不规则热或不发热。盗汗或大汗，睾丸肿大，一个或多个关节发生无红肿热的疼痛，肌肉酸痛，应用一般镇痛药不能缓解，由于关节和肌肉疼痛难忍，即使不发烧也不能劳动，成为能吃不能活懒汉，故该病又被称作"懒汉病"。病灶发生在生殖器官，影响生育，严重者可引起死亡。

　　家畜患病没有治疗价值。应全部淘汰，消灭传染源。
　　人患病，病情复杂，与多种疾病相类似，临床难于鉴别，易发生误诊。一般医院初诊误诊率在25％以上。凡有与易感动物或其产品接触史者，在发生类似布氏杆菌病表现时，应及时向临床医生提醒，作布氏杆菌检查，以免误诊，贻误治疗，力争早确诊早治疗。布氏杆菌病多选用四环素与链霉素联合应用。也可用复方磺胺加链霉素。最近认为利福平与强力霉素联合治疗，治疗好后很少复发。

　　四、微生物学检验

　　本菌传染性大，要注意防止实验室污染。

　　（一）分离培养

　　急性期采集血液，慢性期采取骨髓，接种于双相肝浸液培养基（一半斜面，一半液体）置37℃10%CO2环境中培养，每隔2天检查一次，如无细菌生长则摇荡培养基，使液体浸过斜面上，有细菌生长，可依鉴定项目确定是否为布氏杆菌。经一月培养无细菌生长，可报告阴性。

　　（二）血清学检查

　　通常作凝集试验，判定凝集效价1：50可疑，1：100以上为阳性。效价增高4倍以上时，更有诊断价值。

第四节炭疽杆菌

美国国内先后传出了几例病人感染炭疽病的消息，目前已有1名感染者死亡。在该事件中，邮件成为"恐怖武器"炭疽病菌的代名词。至15日，美国已有12人因直接或间接接触夹带有炭疽杆菌的邮件而受感染。美国卫生与服务部部长汤普森不无忧虑地说："很多人终日惶惶不安，要知道，美国还从未遭受过这样的生物病菌袭击。"美有关部门在经过调查后否定了自然感染的原因，已经初步认定此事可能与恐怖袭击有关。

美国专家曾经指出，如果把炭疽当成生物武器使用，其杀伤力不逊于氢弹，足以造成整个城市和地区陷入瘫痪状态。美国国会技术评估局在1993年发表的报告估计，如果向华盛顿特区喷射100公斤炭疽孢子，13万~300万人可能丧生，其伤害力即使不超过氢弹也会跟氢弹一样。报告补充说，这类攻击的特征是"一座城市或地区突然出现大批类似流行感冒的急性病人，死亡率高达80%或更高，将近一半的死亡是发生在24~48小时内。"专家说，万一爆发生物攻击，重点应该放在及早鉴定是不是炭疽孢子上，接着通知危险地区。早日接受抗生素疗法是必要的。另外，虽然这类疫苗的供应量有限，但事后注射疫苗也是必要措施之一。

炭疽杆菌（Bacillus anthraci）属于需氧芽胞杆菌属，能引起羊、牛、马等动物及人类的炭疽病。炭疽杆菌曾被帝国主义作为致死战剂之一。平时，牧民、农民、皮毛和屠宰工作者易受感染。皮肤炭疽在我国各地还有散在发生，不就放松警惕。

一、生物学性状

（一）形态染色

炭疽杆菌菌体粗大。排列似竹节状，无鞭毛，无动力，革兰氏染色阳性，本菌在氧气充足，温度适宜（25～30℃）的条件下易形成芽胞。

在活体或未经解剖的尸体内，则不能形成芽胞。芽胞呈椭圆形，位于菌体中央，其宽度小于菌体的宽度。形成荚膜是毒性特征。

炭疽杆菌受低浓度青霉素作用，菌体可肿大形成园珠，称为“串珠反应”。这也是炭疽杆菌特有的反应。

（二）培养特性

1、本菌专性需氧，在普通培养基中易繁殖。

2、最适温度为37℃，最适pH为7.2～7.4

3、在琼脂平板培养24小时,粗糙菌落。菌落呈毛玻璃状，边缘不整齐，呈卷发状，有一个或数个小尾突起，这是本菌向外伸延繁殖所致

4、在5～10%绵羊血液琼脂平板上，菌落周围无明显的溶血环，但培养较久后可出现轻度溶血。菌落有粘性，用接种针钩取可拉成丝，称为“拉丝”现象。

5、在普通肉汤培养18～24小时，管底有絮状沉淀生长，无菌膜，菌液清亮。有毒株在碳酸氢钠平板，20%CO2培养下，形成粘液状菌落（有荚膜），而无毒株则为粗糙状。

（三）抵抗力

繁殖体抵抗力不强，易被一般消毒剂杀灭，而芽胞抵抗力强，在干燥的室温环境中可存活数十年，在皮毛中可存活数年。牧场一旦被污染，芽胞可存活数年至数十年。煮沸10分钟或干热140℃3小时可将芽胞杀死。炭疽芽胞对碘特别敏感，对青霉素、先锋霉素、链霉素、卡那霉素等高度敏感。

二、致病性与免疫性

（一）致病性

人类主要通过工农业生产而感染。机体抵抗力降低时，接触污染物品可发生下列疾病：

1．皮肤炭疽 最常见，多发生于屠宰、制革或毛刷工人及饲养员。本菌由体表破损处进入体内，开始在入侵处形成水疖、水疱、脓疱、中央部呈黑色坏死，周围有浸润水肿、如不及时治疗，细菌可进一步侵入局部淋巴结或侵入血流，引起败血症死亡。

2．纵隔障炭疽 少见，由吸入病菌芽胞所致，多发生于皮毛工人，病死率高。病初似感冒，进而出现严重的支气管肺炎，可在2～3天内死于中毒性休克。

3．肠炭疽 由食入病兽肉制品所致，以全身中毒症状为主，并有胃肠道溃疡、出血及毒血症，发病后2～3日内死亡。

上述疾病若引起败血症时，可继发“炭疽性脑膜炎”。炭疽杆菌的致病性取决于荚膜和毒素的协同作用。

（二）免疫性

注射炭疽外毒素中保护性抗原于机体，能形成抗毒素免疫，对受染咴疽有保护作用。但单纯的荚膜抗体对机体没有保护作用。病后可获较强的免疫力。

三、微生物学检查

采集皮肤炭疽的脓液、渗出物，吸入性炭疽的咯痰，肠炭疽的粪便以及病人的的血液等送检，兽尸禁止解剖，可割取耳朵或舌尖一片送检。

将标本直接涂片，沙黄荚膜染色镜检，观察形态及荚膜特征，可以初步帮助诊断，确诊应进行血平板分离培养，37℃孵育12～15小时，钩取可疑菌落，进行青霉素串珠试验，噬菌体裂解试验，碳酸氢钠平板二氧化碳培养。荚膜肿胀试验和小白鼠致病力试验等与其他需氧芽胞杆菌进行鉴别确定。

四、特异防治

预防人类炭疽首先应防止家畜炭疽的发生。家畜炭疽感染消灭后，人类的传染源也随之消灭。

目前我国使用的炭疽活疫菌，作皮上划痕接种，免疫力可维护半年至一年。青霉素是治疗炭疽的首选药物，对肠道及吸入性炭疽治疗困难，有条件的可用抗血清。

以上为2006年07月01日更新。

第六章 乳与乳制品中微生物及其检测

1、乳及乳制品的感官鉴别要点?

感官鉴别乳及乳制品，主要指的是眼观其色泽和组织状态、嗅其气味和尝其滋味，应做到三者并重，缺一不可。

对于乳而言，应注意其色泽是否正常、质地是否均匀细腻、滋味是否纯正以及乳香味如何。同时应留意杂质、沉淀、异味等情况，以便作出综合性的评价。

对于乳制品而言，除注意上述鉴别内容而外，有针对性地观察了解诸如酸乳有无乳清分离、奶粉有无结块，奶酪切面有无水珠和霉斑等情况，对于感官鉴别也有重要意义。必要时可以将乳制品冲调后进行感官鉴别。

2、原料乳卫生状况对乳及乳制品质量的影响

原料乳卫生质量的优劣直接关系到乳及乳制品的质量。原料的卫生质量问题主要是病牛乳(结核病、乳房炎牛的乳)、高酸乳、胎乳、初乳，应用抗生素五天内的乳、掺伪乳以及变质乳等。患结核病牛的乳汁不得作消毒乳供人饮用，只能加工成乳制品。患乳房炎牛乳、产犊前十五天的胎乳、产犊后七天的初乳、应用抗生素五天内的乳及变质乳既不得作消毒乳也不得加工成乳制品。高酸乳不得作消毒乳和良质乳品原料。对掺伪的乳要分清情况处理，对加入了水、蔗糖、食盐、豆浆、淀粉等物的牛乳不得作消毒乳供人饮用，可用于加工乳制品。对掺入了非食用物质的乳，不得食用或加工乳制品。

3、微生物污染对乳及乳制品质量的影响

微生物的污染是引起乳及乳制品变质的重要原因。在乳及乳制品加工过程中的各个环节如灭菌、过滤、浓缩、发酵、干燥、包装等，都可能因为不按操作规程生产加工而造成微生物污染。所以在乳及乳制品的加工过程中，对所有接触到乳及乳制品的容器、设备、管道、工具、包装材料等都要进行彻底的灭菌，防止微生物的污染，以保证产品质量。另外在加工过程中还要防止机械杂质和挥发性物质(如汽油)等的混入和污染。

4、保存条件对乳及乳制品质量有何影响

(1)温度：乳及乳制品若在贮藏时温度过高既可加速一些成分的氧化变质，又可加速微生物的生长繁殖，因此在乳及乳制品贮藏时要掌握好所需的温度。消毒牛乳和硬质干酪贮藏温度为2～10℃，酸牛乳贮藏温度为2～8℃，乳粉和炼乳的贮藏温度在20℃以下，奶油贮藏温度在－15℃以下。

(2)时间：乳及乳制品贮藏时间过长就容易发生卫生质量的改变。因此乳及乳制品在销售时要注意贮新售旧，超过保存期的不得出售。消毒牛乳保存期为24小时，酸牛乳的保存期为72小时，全脂无糖炼乳保质期为1年，罐装的为全脂加糖炼乳保质期为9个月，瓶装者3个月，奶油在－15℃以下冷藏保质期6个月，4～6℃存放时间不得超过7天，乳粉有罐装密封充氮包装时保存期为2年，罐装非充氟包装的保存期为1年，玻璃瓶装者保存期为9个月，塑料袋装保存期为4个月。

(3)湿度：对于固体、半固体的乳制品，贮藏环境湿度不能过大，因为这些乳制品受潮后易使微生物繁殖生长或结块等。如炼乳，乳粉的贮藏环境应通风良好，保持干燥。硬质干酪要求贮藏在相对湿度 80％～85％的环境里。

(4)光线：光线照射可加速乳及乳制品中一些成分的变质，如脂肪、维生素等的氧化。因此乳及乳制品在加工、运输、贮藏、销售等过程中均应尽量避免光线照射。

5、鉴别鲜乳的质量

(1)色泽鉴别

良质鲜乳——为乳白色或稍带微黄色。

次质鲜乳——色泽较良质鲜乳为差，白色中稍带青色。

劣质鲜乳——呈浅粉色或显著的黄绿色，或是色泽灰暗。

(2)组织状态鉴别

良质鲜乳——呈均匀的流体，无沉淀、凝块和机械杂质，无粘稠和浓厚现象。

次质鲜乳——呈均匀的流体，无凝块，但可见少量微小的颗粒，脂肪聚粘表层呈液化状态。

劣质鲜乳——呈稠而不匀的溶液状，有乳凝结成的致密凝块或絮状物。

(3)气味鉴别

良质鲜乳——具有乳特有的乳香味，无其他任何异味。

次质鲜乳——乳中固有的香味稍使或有异味。

劣质鲜乳——有明显的异味，如酸臭味、牛粪味、金属味、鱼腥味、汽油味等。

(4)滋味鉴别

良质鲜乳——具有鲜乳独具的纯香味，滋味可口而稍甜，无其他任何异常滋味。

次质鲜乳——有微酸味(表明乳已开始酸败)，或有其他轻微的异味。

劣质鲜乳——有酸味、咸味、苦味等。

乳是营养丰富，容易消化吸收的食品，含有蛋白质、脂肪、糖、无机盐、维生素等多种营养物质。其中，乳蛋白中含有人体所必需的各种氨基酸；乳脂肪含有较多的不饱和脂肪酸，故其熔点较低(27℃～34℃)，因此，容易被人体消化吸收。乳糖对儿童大脑的发育是不可缺少的，它能促进脑组织中糖脂化合物的生成，还能促进机体对食中的钙和磷的吸收及贮存；牛乳中的钙和磷可满足婴儿的需要，铁能被完全吸收，乳中有人体体需要的各种维生素，此外，乳能抑制胆固醇的合成，对老年高血压及心血管病患者有益。因此，乳很适宜婴幼儿及成人，包括老人等食用。

特别适合细菌生长繁殖。乳一旦被微生物污染，在适宜条件下，微生物可迅速增殖。引起乳的腐败变质；乳如果被致病性微生物污染，还可引起食物中毒或其它传染病的传播，微生物的种类不同，可以引起乳的不同的变质现象，了解其中的变化规律，可以更好的控制乳品生产，为人类提供更多更好的乳制品。

第一节 鲜乳中的微生物及其检验

乳极容易受微生物污染而变质，污染乳的微生物可来自乳畜本身及生产加工的各个环节。 一、鲜乳中微生物的来源 1、乳房 一般情况下，乳中的微生物主要来源于外界环境，而非乳房内部。 乳从乳腺中分泌出来时本应是无菌的，但微生物常常污染乳头开口并蔓延至乳腺管及乳池，挤乳时，乳汁将微生物冲洗下来，带入鲜乳中，一般情况下，最初挤出的乳含菌数比最后挤出的多几倍。因此，挤乳时最好把头乳弃去。 正常存在于乳房中的微生物，主要是一些无害的球菌：当乳汁刚从健康畜体内挤出时，其所含的细菌数并不多，每毫升在几个到几千个之间。细菌的种类也不复杂，只有在管理不良，污染严重或当乳房呈现病理状态时，乳中的细菌含量及种类才会大大增加，甚至有病原菌存在。 当乳畜患有结核病、布鲁氏杆菌病、炭疽、口蹄疫、李氏杆菌病、伪结核、胎儿弯曲杆菌病等传染病时，其乳常成为人类疾病的传染来源。来自乳房炎、副伤寒患畜的乳；可能引起人的食物中毒，因此，对乳畜的健康状况必须严格监督，定期检查。 2、乳畜体表 乳畜体表及乳房上常附着粪屑、垫草、灰尘等。挤乳时不注意操作卫生，这些带有大量微生物的附着物就会落入乳中，造成严重污染，这些微生物多为芽胞杆菌和大肠杆菌。因此，挤乳前要彻底清洗乳房，减少乳的污染。 3、容器和用具 乳生产中所使用的容器及用具，如乳桶、挤乳机、滤乳布和毛巾等不清洁，是造成污染的重要途径。特别在夏秋季节，．当容器及用具洗涮不彻底，消毒不严格时，微生物便在残渣中生长繁殖，这些细菌又多属耐热性球菌(约占70％)和杆菌，一旦对乳造成污染，即使高温瞬间灭菌也难以彻底杀灭。 4、空气 畜舍内飘浮的灰尘中常常含有许多微生物．通常每升空气中含有50—100个细菌，有尘土者可达1000个以上。其中多数为芽胞杆菌及球菌，此外也含有大量的霉菌孢子。空气中的尘埃落入乳中即可造成污染。因此，必须保持牛舍清洁卫生，打扫牛舍宜在挤乳后进行，挤乳前1小时不宜清扫。 5、水源 用于清洗牛乳房、挤乳用具和乳槽所用的水是乳中细菌的一个来源，井、泉、河水可能受到粪便中细菌的污染，也可能受土壤中细菌的污染。主要是一定数量的嗜冷菌。因此，这些水必须经过清洁处理或消毒后方可使用。 6、蝇、蚊等昆虫 蝇、蚊有时会成为最大的污染源，特别是夏秋季节，由于苍蝇常在垃圾或粪便上停留，所以每个苍蝇萨体表可存在几百万甚至几亿个细菌。其中包括各种致病菌，当其落入乳中时就可把细菌带入乳中造成污染。 7、饲料及褥草 乳被饲料中的细菌污染，主要是在挤乳前分发干草时，附着在干草上的细菌(主要是芽胞杆菌，如酪酸芽胞杆菌、枯草杆菌等)，随同灰尘、草屑等飞散在厩舍的空气中，既污染了牛体。又污染了所有用具，或挤乳时直接落入乳桶，造成乳的污染。此外，往厩舍内搬入褥草时，特别是灰尘多的碎褥草，舍内空气可被大量的细菌所污染，因此成为乳被细菌污染的来源。混有粪便的褥草，往往污染乳牛的皮肤和被毛，从而造成对乳的污染。 8、工作人员 乳业工作人员，特别是挤乳员的手和服装，常成为乳被细菌污染的来源。，因为在指甲缝里，手皮肤的皱纹里往往积聚有大量的微生物，甚至致病菌，所以，挤乳人员如不注意个人卫生，不严格执行卫生操作制度。挤乳时就可直接污染乳汁。特别是工作人员如果患有某些传染病，或是带菌(毒)者则更危险：因此．乳业工作人员应定期进行卫，生防疫和体检，以便及时杜绝传染源。

二、鲜乳中的微生物类群

鲜乳中污染的微生物有细菌、酵母和霉菌等多种类群。但最常见的而且活动占优势的微生物；主要是一些细菌。

1、能使鲜乳发酵产生乳酸的细菌

这类细菌包括乳酸杆菌和链球菌两大类，约占鲜乳内微生物总数的80％。它们可进行同型乳酸发酵，产生大量乳酸，使鲜乳均匀凝固。这些菌不产生芽胞，没有鞭毛、革兰氏染色阳性，兼性厌氧。

(1)链球菌类：

较为常见和重要的有：乳酸链球菌、乳酪链球菌、粪链球菌、嗜热链球菌、液化链球菌。

乳酸链球菌能分解葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖和麦芽糖而产生乳酸和其它少量有机酸，如醋酸和丙酸等，在乳液中的产酸量可达1％，它普遍存在于乳液中，几乎所有的生鲜乳中，均能检出这种细菌，最适生长温度为30~C一35℃。

乳酪链球菌不仅能分解乳糖而产酸，而且具有较强的蛋白分解能力。

粪链球菌在人类和温血动物的肠道内均有存在，能分解葡萄糖、蔗糖、乳糖、果糖、半乳糖和麦芽糖等，在乳液中繁殖而产酸，产酸力不强，生长最低温度为10℃，最高为45~C。

嗜热链球菌能分解蔗糖、乳糖、果糖而产酸，最适生长温度为40~C一45℃。

(2)乳酸杆菌类

较常见的和重要的有嗜酸乳杆菌、保加亚利乳杆菌、干酪乳杆菌、短乳杆菌、发酵乳杆菌。乳酸乳杆菌等。

嗜酸乳杆菌，为一种细而长的杆菌，单在、成对或成短链排列，革兰氏阳性。不产生芽胞，不能运动，生长最适温度为35~C～42~C，高于53C或低于20C时则不能生长，它是最早被利用的乳酸菌，常作为乳酸饮料的生产菌种。

干酪乳杆菌，为短杆状或长杆状细菌，呈短链或长链排列，能发酵葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖产生乳酸，10----40℃均可生长，最适生长温度为30℃，能利用酪蛋白，在干酪制作中育重要作用。

2、能使鲜乳发酵产气的细菌

这类微生物能分解碳水化合物，生成乳酸及其它有机酸，并产生气体(二氧化碳和氢气)，能使牛乳凝固，产生多孔气泡，并产生异味和臭味。

大肠菌群，主要有大肠杆菌和产气杆菌，这类细菌除产酸产气外，还能分解蛋白质，产生异味，影响乳的质量，这类垣葛弓苎．说明卫生方面不合格。

丁酸菌类，主要有丁酸梭菌、魏氏梭菌等，使鲜乳产酸产气，其中的丁酸，气味恶臭，所产气体量很大，可使凝固的鲜乳裂成碎块，形成暴烈发酵现象。

丙酸细菌也能使鲜乳产酸产气，丙酸菌的发酵可使干酪形成网眼，并产生特殊的芳香风味，对干酪的品质有良好的影响。

3、分解鲜乳蛋而发生胨化的细菌

这类腐败菌能分泌凝乳酶，使乳液中的酪蛋白发生凝固，然后又发生分解，使蛋白质水解胨化，变为可溶性状态。假单胞菌属，分解蛋白质能力极强，可将蛋白质形成胺和氨，并产生不良气味。

液化粪链球菌、蜡样芽胞杆菌、变形杆菌等使乳产酸与蛋白质分解同时进行。产碱杆菌属、黄杆菌属、微球菌属等低温菌，能在低温条件下使蛋白质分解，从而使冷藏乳腐败变质并产生苦味。

4、使鲜乳呈碱性的细菌

主要有粪产碱菌和粘乳产碱菌，粪产碱菌不产生芽胞，菌体杆状，革兰氏阴性，好氧，有运动性，常存在于肠道内，由粪便混入鲜乳中；粘乳产碱菌不运动。其它特征粪产碱菌相似，常存在于水中，故通常由水混入到鲜乳中，使鲜乳变为粘稠。这两种纽重子笔分解柠檬酸盐为碳酸盐，而使鲜乳呈碱性反应。

5、引起鲜乳变色的细菌

正常鲜乳呈白色或略带黄色，由于某些细菌的发育可使乳呈现不同颜色。

深蓝色假单胞菌产生的色素，在中性或碱性乳中呈灰色，在酸性乳中呈蓝色。

黄假单胞菌在乳中繁殖时，分解乳中的脂肪、蛋白质并产生淡黄色色素，从而使乳呈黄色，此外黄杆菌属的细菌增后也可使乳呈黄色。

粘质沙雷氏菌在乳中纯培养可引起红乳，但通常情况，由于其它细菌阢下量繁殖抑制了该菌生长，故红乳很少见。

6、鲜乳中的嗜冷菌和嗜热菌

嗜冷菌主要是一些荧光细菌、霉菌等。

嗜热细菌主要是芽胞杆菌属内的某些菌种和一些嗜热性球菌等。

7、鲜乳中的霉菌和酵母军

霉菌以酸腐节卵孢霉为最常见，其它还有乳酪节卵孢霉、多主枝孢霉，灰绿青霉、黑含天霉，异念球霉、灰绿曲霉和黑曲霉等。鲜乳中常见酵母为脆壁酵母、洪氏球拟酵母、高加索乳酒球拟酵母，球拟酵母等。

8、鲜乳中可能存在的病原菌

(1)来自乳畜的病原菌

乳畜本身患传染病或乳房炎时，在乳汁中常有病原菌存在。常见的有结核分支杆菌、副结核分枝杆菌，布氏杆菌、溶血性大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、无孚L链球菌等。

(2)来自人为因素的病原菌

主要是工作人员患病或是带茵者，或者是生产过程中各方的污染，使鲜乳中带有某些病原菌：如伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌、志贺氏杆菌、霍乱弧菌、白喉杆菌、猩红热链球菌、人型结核分枝杆菌等。

(3)来自饲料被霉菌污染所产生的有毒代谢产物

如乳畜长期食用含有黄曲霉毒素(B1)的饲料，这种毒素可转变为存在于乳中的黄曲霉毒素(M1)。研究证明，饲料中黄曲霉毒素含量超过60ug／kg时，就能造成乳的污染。

三、鲜乳贮藏过程中的微生物学变化

1 、牛乳在室温下贮存时微生物的变化

新鲜牛乳在杀菌前都有一定数量的、不同种类的微生物存在，如果放置在室温（10 一21 ℃ ）下，会因微生物在乳液中活动而逐渐使乳液变质。

室温下微生物的生长过程可分为以下几个阶段

(1)、抑制期

特征：牛乳中均含有多种抗菌性物质，它在最初阶段抑制牛乳中的微生物，使其中的微生物反而减少。

这种杀菌作用源于一种名为“乳烃素”的细菌抑制物，分为两种：即乳烃素1和乳烃素2 ，前者存在于初乳中，后者存在于常乳中，这种细菌抑制物的破坏温度是70 ℃ 、20min。在含菌少的鲜乳中，其作用可持续36h （在13 一14 ℃ 的温度下）；若在污染严重的乳液中，其作用可持续18h 左右。乳烃素的杀菌或抑菌作用随温度的升高而增强，但持续时间会缩短。因此，鲜乳放置在室温环境中，在一定的时间内并不会出现变质的现象。
( 2 ）、乳链球菌期

生鲜牛乳过了抑菌期后，抗菌物质减少或消失，其内的微生物迅速繁殖，尤其是细菌的繁殖占绝对优势，致使牛乳凝块出现。

这些细菌主要是乳链球菌、乳酸杆菌、大肠杆菌和一些蛋白分解菌等，特别是乳链球菌生长繁殖特别旺盛。乳链球菌分解牛乳中的乳糖产生乳酸，牛乳的酸度不断升高。如大肠菌增殖，将会有产气现象出现。由于牛乳酸度不断升高，其他腐败细菌的活动就受抑制。当酸度升高至一定限度时（pH4.5) ，乳链球菌本身受到抑制不再继续繁殖，相反会逐渐减少，这时就有牛乳凝块出现。

( 3 ）乳酸杆菌期

乳链球菌在牛乳中繁殖，使牛乳PH 下降至6 左右．这时乳酸杆菌的活动力逐渐增强。当困继续下降至4.5以下时，由于乳酸杆菌耐酸力较强，尚能继续繁殖并产酸。此时还有非常耐酸的丙酸菌、孢子形成菌等出现，它们会消耗部分乳酸而形成一些优势菌。

特征：乳液中可出现大量乳凝块，并有大量乳清析出。

( 4 ）真菌期

当酸度继续下降至PH3.5—3 时，绝大多数微生物被抑制甚至死亡，仅酵母和霉菌尚能适应高酸性的环境，并能利用乳酸及其他一些有机酸，于是形成优势菌。特征：由于酸的被利用，乳液的酸度会逐渐降低，使乳液的PH不断上升接近中性。

( 5 ）胨化菌期

经过上述几个阶段的微生物活动后，乳液中的乳糖大量被消耗，残余量已很少，在乳中仅是蛋白质和脂肪尚有较多的量存在。因此，适宜于分解蛋白质和脂肪的细菌在其中生长繁殖，这样就产生了乳凝块被消化（液化）、乳液的pH 逐步提高向碱性方向转化，并有腐败的臭味产生的现象。这时的腐败菌大部分是属于芽抱杆菌属、假单胞菌属以及变形杆菌属的一些细菌。

特征：乳凝块被消化（液化）、乳液的pH 逐步提高向碱性方向转化，并有腐败的臭味产生的现象。

2 、牛乳在冷藏中微生物的变化

生鲜牛乳在未消毒即冷藏保存的条件下，一般的嗜温微生物在低温环境中被抑制；而属于低温微生物却能够增殖，但生长速度非常缓慢。低温中，牛乳中较为多见的细菌有：假单胞菌、醋酸杆菌、产碱杆菌、无色杆菌、黄杆菌属等，还有一部分乳酸菌、微球菌、酵母菌和霉菌等。

冷藏乳的变质：主要指乳脂肪的分解。多数假单胞菌属中的细菌，均具有产生脂肪酶的特性，它们在低温时活性非常强并具有耐热性，即使在加热消毒后的牛乳中，残留脂肪酶还有活性。

冷藏牛乳中可经常见到低温细菌促使牛乳中蛋白分解的现象，特别是产碱杆菌属和假单胞菌属中的许多细菌，它们可使牛乳胨化。